JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》解读

JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》自2015年6月15日由国家质检总局批准发布并于2015年9月15日起实施，旨在保证聚合酶链反应分析仪测量量值的准确，具有可溯源性，使不同仪器之间的测量数据具有可比性。

　一、规范制定的背景和目的

Polymerase Chain Reaction(PCR)，中文译为聚合酶链反应，是一种DNA的快速扩增技术，其扩增效率之高就像核裂变的“链式反应”那样。PCR技术可以在2个小时内把特定的DNA量提高1000万倍。聚合酶链反应分析仪是完成聚合酶链反应的必备仪器，是微量核酸测量必需的主要设备之一，已经广泛普及于生物学相关的各个实验室，成为生命科学研究、临床检验、法医检验、血液制品检验、食品微生物检验、动植物物种研究与检验等实验室的必备仪器设备之一。

　　特别是随着定量PCR仪的开发和发展，聚合酶链反应分析仪在生命科学领域、食品科学领域、药物研发和生物技术产品开发领域发挥着越来越重要的作用。这些实验室对外提供具有法律效率的检测数据，需要经过计量认证和认可。

　　然而目前该类仪器的校准，既没有行业标准也没有国家标准，各检测实验室采用仪器厂家检验或自校验的方式校准该类仪器，其技术要求、校验条件、校验项目、校验方法、校验结果的处理各不相同。因此，需要制定聚合酶链反应分析仪校准规范，为该类仪器的校准提供技术依据，使得使用该类仪器检测的各类实验室，能够更好地为社会提供客观、可比、可溯源的检测数据。根据国家质量监督检验检疫总局2009年国家计量技术法规计划(国质检量函〔2009〕393号)立项，由全国生物计量技术委员会委托中国计量科学研究院承担JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》的制定工作。

　　二、规范制定的主要内容

JJF1527-2015包括封面、扉页、目录、引言、范围、引用文件、术语和计量单位、概述、计量特性、校准条件、校准项目和校准方法、校准结果表达、复校时间间隔以及附录几个部分，根据JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》撰写。

1.范围

JJF1527-2015适用于模块加热的聚合酶链反应分析仪计量性能的校准，对于其他类型的PCR仪，可参照本规范执行。

2.引用文件

GB/T6682-2008分析实验室用水国家标准，YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪。

　　凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。

3.术语

　　本部分对JJF1527-2015中使用的名词术语和计量单位进行了定义，包括聚合酶链反应和聚合酶链反应分析仪。

4.概述

　　本部分主要对聚合酶链反应分析仪的原理和仪器组成进行了简要介绍。

5.计量特性

　　本部分规定了聚合酶链反应分析仪的计量特性，根据在多台聚合酶链反应分析仪上进行计量特性的具体实验结果，选择了温度示值误差、温度均匀度、平均升温速率、平均降温速率、样本示值误差和样本线性6个指标作为聚合酶链反应分析仪的计量特性指标。根据JJF1071-2010的要求，计量特性指标中没有给出各项计量特性指标的具体限定值。

6.校准条件

　　本部分主要规定了聚合酶链反应分析仪校准时需要满足的环境条件，以及使用的标准物质和试剂。

7.校准项目和校准方法

　　本部分主要针对聚合酶链反应分析仪的温度示值误差、温度均匀度、平均升温速率、平均降温速率、样本示值误差和样本线性等计量特性指标的具体测定方法作出了要求。

8.校准结果表达

　　经校准后的聚合酶链反应分析仪应填发校准证书，校准证书应符合JJF1071-2010中5.12的要求，参照附录给出校准项目名称、测量值以及扩展不确定度。

9.复校时间间隔

　　由于复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等诸因素决定的，因此，用户可根据实际使用情况自主决定复校时间，建议不超过1年。

10.附录

　　本部分主要对标准物质的准备及配制、PCR反应体系的配制、示值误差结果的不确定度评定、校准原始记录参考格式、校准证书(内页)参考格式等进行了具体的描述和规定。

　三、规范执行中应注意的问题

1.术语与计量单位的选择

　　术语和计量单位原则上与SN/T2102.1-2008/ISO22174:2005食源性病原体PCR检测技术规范第一部分:通用要求及定义，以及YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪等现行国家标准规定的保持一致。

2.计量特性确定原则

　　通过在一定数量、具有代表性的不同型号、不同厂家生产的聚合酶链反应分析仪上的实验，根据聚合酶链反应分析仪在实际应用中的主要功能和性能指标，考虑其具体应用的要求，形成本规范确定的计量特性。

3.温度校准设备及标准物质选择的原则

　　计量特性确定的实验研究过程中使用了经过校准的15探头和16探头的PCR温度校准专用设备及DNA标准物质。温度校准设备现在市场上有售，经过计量校准后即可使用。DNA标准物质是由中国计量科学研究院发布的有证标准物质，易于获得而且可以溯源。

4.示值误差的不确定度评定

　　以具体的校准实例给出了温度示值误差和样本示值误差的不确定度评定的具体的过程和模型，校准过程中依据规范提供的模型给出校准结果的不确定度。